In Blade: Trinity bekommt es der Daywalker zum ersten Mal mit dem Vampir aller Vampire Drake alias Dracula zu tun. Dieser, gespielt von Prison Break - Star Dominic Purcell, wird von einer Gruppe Vampire aus seinem Grab befreit, mit dem Ziel sie alle zu Daywalkern zu transformieren. Nach Whistlers Tod muss Blade mit der Untergrundorganisation Nightstalker zusammen arbeiten, die auch in den Kampf gegen Vampire geht. Zu dieser gehört neben Whistlers Tochter Abigail auch der Draufgänger Hanibal King. Ziel der Gruppe ist es, mit dem von ihnen entwickelten Virus Day Star alle Vampire zu vernichten. Dafür brauchen sie jedoch als letztes Element einen Tropfen von Drakes Blut, der das Virus erst wirkungsvoll genug macht. Die Schlacht zwischen den Nightstalkern rund um Blade und den Vampiren beginnt.

Bei einem Autounfall erleidet Jack Barnes Kopfverletzungen, die sein Leben verändern. Nach dem Unfall hat er unerklärliche Vorahnungen von entsetzlichen Attentaten, die stattfinden werden. Zunächst bleiben seine Warnungen unbeobachtet, aber als seine Visionen Wirklichkeit werden, wird auch das FBI auf ihn aufmerksam. Während er versucht, die Bedeutung der Visionen zu entschlüsseln, beginnt ein Wettlauf mit der Zeit, die Terroristen zu stoppen, ehe sie wieder zuschlagen.